上海纖檢揮發(fā)性鹽基氮測定儀使用方法
上傳時間：2026/6/5 17:19:07 來源：易買儀器網(wǎng) 點擊：118
一、檢測原理
樣品中的蛋白質(zhì)在腐敗過程中產(chǎn)生氨和胺類等揮發(fā)性堿性含氮物，在氧化鎂堿性條件下被水蒸氣蒸餾出來，經(jīng)冷凝后導(dǎo)入硼酸吸收液中，然后用標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液滴定，通過消耗的酸量計算出每100g樣品中含揮發(fā)性鹽基氮的毫克數(shù)（mg/100g）。
二、試劑配制
1. 氧化鎂混懸液（10g/L或1%）
稱取10g氧化鎂（MgO），加少量水調(diào)成糊狀后再稀釋定容至1000mL，每次使用前都要充分搖勻，因為氧化鎂容易沉底。
2. 硼酸吸收液（1%）
稱取10g硼酸（H3BO3）溶于約800mL熱蒸餾水中，冷卻后定容至1000mL。再按每100mL硼酸液加入：
· 溴甲酚綠-乙醇溶液（1 g/L）約1mL
· 甲基紅-乙醇溶液（1 g/L）約0.7mL
混合后吸收液應(yīng)呈紫紅色/酒紅色；當(dāng)蒸餾出的氨被吸收后，顏色會逐漸變藍(lán)綠/綠，這就是你滴定的終點判斷依據(jù)。
3. 鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液
通常用 0.0100 mol/L或0.1000mol/L HCl（視樣品含量高低和蒸餾取樣體積而定），須用基準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)定出實際濃度C。
4. 無氨蒸餾水
所有用水應(yīng)為去離子水或重蒸水，確保不含氨氮干擾。
三、樣品前處理
1. 取樣代表性最關(guān)鍵：從整塊肉/魚中取瘦肉部分，去除皮、骨、脂肪、結(jié)締組織、筋膜和病變組織。
2. 將凈肉切碎 → 絞碎 → 充分混勻，保證均勻。
3. 準(zhǔn)確稱取 10.0 g 絞碎樣品，放入 250mL錐形瓶或大蒸餾管（如750mL管）中。
4. 加入 100mL無氨蒸餾水，在磁力攪拌器上（或不加熱）攪拌/振蕩浸泡 30 min，使揮發(fā)性鹽基氮充分溶出到水相中。
5. 如需澄清液，可過濾或離心取上清液；實際操作中也可以直接將含固體顆粒的浸泡液連同樣品轉(zhuǎn)入蒸餾管（視儀器型號和操作規(guī)程要求）。
· 關(guān)鍵時間點：樣液處理好后應(yīng)盡快測定，不要長時間敞口放置。氧化鎂一旦加入就會立刻反應(yīng)產(chǎn)氨，更要 快、密封好。
四、儀器開機(jī)與準(zhǔn)備工作
1. 檢查水路：確認(rèn)儀器自來水/冷凝水進(jìn)水、排水管路通暢；打開冷凝水。
2. 通電開機(jī)：打開KDN定氮儀電源，儀器自檢完成后進(jìn)入就緒狀態(tài)。
3. 檢查堿液桶/水箱：確認(rèn)蒸餾用純化水充足，廢液桶清空。
4. 如果是 自動機(jī)型（如KDN-19A），需要在觸摸屏/控制面板上預(yù)設(shè)參數(shù)：
· 接收杯內(nèi)預(yù)先加入 30mL硼酸吸收液 + 2~3滴混合指示劑（此時應(yīng)在錐形瓶/接收杯中，冷凝管末端要 浸入液面以下）
· 蒸餾水量（一般設(shè)定約50mL左右加至蒸餾管）
· 蒸餾體積模式（體積模式或時間模式均可，上海纖檢文獻(xiàn)中常用體積模式，蒸餾至約150mL接收液）
· 延時/延遲時間一般設(shè) 10~15s
五、蒸餾與吸收（核心步驟）
手動機(jī)型（如KDN-2C半微量定氮裝置）操作順序：
1. 取一只干凈錐形瓶，加入 20~30mL 2%硼酸吸收液 + 2~3滴混合指示劑，將冷凝管下端 插入液面以下，承接蒸餾液。
2. 用移液管準(zhǔn)確量取 10.0mL 樣品浸泡上清液（或直接將含樣品的蒸餾管就位），放入蒸餾管/消化管中。
3. 用少量無氨水沖洗管壁。
4. 迅速加入 10mL 氧化鎂混懸液（動作要快，加完盡快密封/加蓋，防止氨逸失）。
5. 立即連通蒸氣通路，開始 水蒸氣蒸餾：
· 蒸餾至接收液體積達(dá)到 約150mL（一般約4~6分鐘，視蒸汽量而定）
· 蒸餾過程中觀察冷凝管——如果有大量泡沫上沖，可暫?；虻渭由倭?液體石蠟 消泡
6. 蒸餾結(jié)束時，先讓冷凝管末端離開液面（或用無氨水沖洗外壁），再停止加熱/蒸氣，防止倒吸。
7. 用少量無氨蒸餾水沖洗冷凝管下端外壁，洗液并入接收瓶中。
自動機(jī)型（如KDN-19A）操作要點：
1. 將浸泡好的樣品管（已加樣品+水）放到儀器托盤位上。
2. 先往接收錐形瓶放好硼酸吸收液+指示劑，就位后把冷凝管末端浸入液面。
3. 然后在儀器上選擇/確認(rèn)樣品位 → 儀器自動加堿（或直接提示你人工加入氧化鎂后關(guān)門）→ 關(guān)門啟動 → 自動完成蒸餾、冷凝、收集。
4. 儀器運(yùn)行期間不要開門，確保安全門閉合。
六、滴定
蒸餾完成后，接收瓶中硼酸吸收液已被氨/胺堿中和而 由紫紅變成藍(lán)綠色：
· 用 0.0100 mol/L（或0.1000）HCl標(biāo)準(zhǔn)溶液 進(jìn)行滴定
· 終點：溶液由 藍(lán)綠色 → 灰紫色/灰紅色 即為到達(dá)
· 記錄消耗鹽酸體積 V1（mL）
務(wù)必同步做一個空白對照：
· 空白管：取等量無氨蒸餾水代替樣品液，走完全相同的蒸餾+滴定流程
· 記錄空白消耗鹽酸體積 V2（mL）
七、結(jié)果計算
公式為：
TVB-N(mg/100g)=(V1-V2)*C*14*100/(m*V分/V總)
其中：
· V1 = 樣品消耗HCl體積（mL）
· V2 = 空白消耗HCl體積（mL）
· C = HCl標(biāo)準(zhǔn)溶液的實際濃度（mol/L）
· 14 = 1mmol H+ 相當(dāng)于 14 mg N
· m = 樣品稱樣量（g），這里是 10g
· V分 = 用于蒸餾的樣液體積（mL），如取10mL上清液
· V總 = 樣品浸泡總體積（mL），即 100mL + 樣品本身含水（通常近似按100mL計，嚴(yán)格按實際定容體積算）
八、關(guān)鍵注意事項
1. 氧化鎂加完后不能等——文獻(xiàn)明確指出：樣液中加了氧化鎂后應(yīng) 立即開始測定，放置會使氨提前揮發(fā)導(dǎo)致結(jié)果偏低，且隨放置時間延長偏差更大。
2. 冷凝水必須充足，否則氨不能被有效冷凝捕獲。
3. 冷凝管末端一定要浸入硼酸液面以下，但又要在蒸餾結(jié)束前先提起/沖洗防倒吸。
4. 所有器皿、水必須無氨——手上的汗、空氣中的氨、自來水都會帶來空白偏高。
5. 每批次至少做 一個空白 + 一個加標(biāo)/質(zhì)控樣，回收率應(yīng)在 98%~102% 附近才算可靠。
6. 蒸餾管用完后及時用稀酸刷洗或清水沖洗，防止鎂鹽結(jié)垢堵管。
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